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跟SDS一样,裂解细胞壁释放质粒用的。不过不加也没什么问题,NaOH与SDS足够将大肠杆菌细胞壁裂解开。
溶液Ⅰ:葡萄糖是使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部;EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂,其主要目的是为了螯合二价金属离子从而达到抑制DNase的活性;可添加RNaseA消化RNA。溶液Ⅱ 此步为碱处理。
碱裂解法制备质粒DNA时,溶液Ⅰ中的葡萄糖成分的主要作用是防止大肠杆菌沉淀,保持其悬浮状态。EDTA的作用是螯合钙离子和镁离子等二价金属离子,从而抑制DNase的活性。此外,可以添加RNase A来消化RNA。溶液Ⅱ是碱处理步骤的关键,其中NaOH的作用是溶解细胞,释放DNA。
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